快速內(nèi)切酶是一系列能夠快速消化DNA的工程限制性酶。所有快速內(nèi)切酶在通用CutOne中顯示出優(yōu)異的活性? 和CutOne? 彩色緩沖液，能夠在5~15分鐘內(nèi)消化DNA。這使得任何限制性酶的組合都能在一個(gè)反應(yīng)管中同時(shí)工作，并消除了連續(xù)消化的需要。FlyCut? 酶已通過(guò)多項(xiàng)嚴(yán)格的質(zhì)量控制，可用于消化質(zhì)粒、基因組和病毒DNA以及PCR產(chǎn)物。CutOne??Color Buffer包括密度試劑以及紅色和黃色跟蹤染料，可以將反應(yīng)混合物直接裝載在凝膠上。CutOne的紅色染料? 彩色緩沖液在1%瓊脂糖凝膠中與2.5kb雙鏈DNA片段一起遷移，黃色染料在1%瓊脂凝膠中與10bp雙鏈DNA碎片一起遷移。

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快速內(nèi)切酶AgeI組成：

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艾美捷快速內(nèi)切酶AgeI：

Cat #: C-BSM3501

Size: 25 rxns

Storage: -20°C

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推薦反應(yīng)條件

1x CutOne“緩沖器；

在37°C下培養(yǎng)；

有關(guān)反應(yīng)設(shè)置，請(qǐng)參閱“快速DNA消化方案”。

熱滅活

在80°C下培養(yǎng)20分鐘。

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快速內(nèi)切酶AgeI質(zhì)量控制：

功能測(cè)試

在含有1μg p615 DNA和1μul FlyCut Agel的CutOne“”緩沖液中，在37°C下孵育15分鐘，反應(yīng)20μl，瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定完全消化。

長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)/星形活性測(cè)定

在含有1μg p615 DNA和1μl FlyCut’’Agel的CutOne’緩沖液中，在37℃下孵育3小時(shí)，反應(yīng)20μl，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)到DNA模式?jīng)]有可檢測(cè)的核酸酶降解。長(zhǎng)期孵育可能導(dǎo)致星形活性。

結(jié)扎和清算

在37°C下用FlyCut“”Agel消化10倍后，>95%的DNA片段可以在22℃下與T4 DNA配體連接。在這些連接的片段中，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定，>95%可以用FlyCut“”Agel重新切割。

非特異性核酸內(nèi)切酶活性

在含有1μg超螺旋質(zhì)粒和1μl FlyCut“”Agel的CutOne“緩沖液中，在37℃下孵育4小時(shí)，20μl反應(yīng)導(dǎo)致通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定的向刻痕或線性化形式的轉(zhuǎn)化率<10%。

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藍(lán)/白篩選試驗(yàn)：

用1μl FlyCut消化含有l(wèi)acZα基因的合適載體? 年齡1。將消化產(chǎn)物連接并轉(zhuǎn)化為大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞。在含有X-Gal、IPTG和適當(dāng)抗生素的Luria Bertani培養(yǎng)板上，成功連接的β-半乳糖苷酶基因可以表達(dá)并產(chǎn)生藍(lán)色菌落，而中斷基因（即降解的DNA末端）產(chǎn)生白色菌落。FlyCut? 限制性內(nèi)切酶必須產(chǎn)生少于1%的白色菌落