免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）是一種利用抗原和抗體特異性結(jié)合原理，探討蛋白與蛋白、蛋白與DNA或RNA之間相互作用的經(jīng)典方法，能夠有效驗(yàn)證細(xì)胞內(nèi)蛋白與其他生物分子的生理性相互作用，也可用于檢測(cè)和純化抗原，對(duì)目的蛋白進(jìn)行定性和定量分析。因此，免疫沉淀技術(shù)根據(jù)檢測(cè)目的不同，可分為免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（co-immunoprecipitation，Co-IP）、染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）、RNA免疫共沉淀（RNA Immunoprecipitation，RIP）以及pull down實(shí)驗(yàn)。這幾種方法的基本原理相同，但也各有特點(diǎn)和適用范圍，小編將分期給大家一一介紹，本期先介紹下IP。

IP原理

???? 將含有目的蛋白的樣品溶液與特異性抗體結(jié)合，該抗體的Fc片段又能結(jié)合到protein A/G上，protein A/G通常會(huì)固定在瓊脂糖顆粒或磁珠上，進(jìn)而達(dá)到吸附目的蛋白的目的，后續(xù)通過離心收集、洗脫、溶解等步驟分離獲得目的蛋白?？贵w可以預(yù)先固定在固相支持物（瓊脂糖或磁珠上）；也可以先是游離狀態(tài)時(shí)與目的蛋白結(jié)合后再結(jié)合到固相支持物上，回收抗原抗體復(fù)合物。

預(yù)固定抗體（A）和游離抗體（B）進(jìn)行免疫沉淀的示意圖

IP一般實(shí)驗(yàn)步驟

1. 收集細(xì)胞并使用IP裂解/洗滌緩沖液裂解細(xì)胞；

2. 可留取少量裂解液用于WB實(shí)驗(yàn)，其余的裂解液進(jìn)行抗原抗體結(jié)合處理，形成抗原抗體復(fù)合物；

3. 免疫沉淀后，通過離心將protein A/G-beads沉淀，小心棄去上清；

4. 用裂解緩沖液洗滌protein A/G-beads 3-4次，每次洗滌后需離心；

5. 洗脫抗原抗體復(fù)合物，得到目的抗原；

6. 對(duì)目的抗原進(jìn)行WB檢測(cè)或質(zhì)譜分析。

???????? 以上便是對(duì)IP實(shí)驗(yàn)的介紹，簡(jiǎn)單的說，就是通過抗原-抗體特異性結(jié)合獲得靶蛋白，然后通過WB或質(zhì)譜對(duì)靶蛋白進(jìn)行定量或定性分析，是免疫沉淀技術(shù)中較為簡(jiǎn)單的一種。下期將對(duì)其延申技術(shù)Co-IP進(jìn)行介紹。漢恒生物專注病毒包裝十余年，若有需求，歡迎大家咨詢聯(lián)系~