總步驟

SDS-PAGE十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳

1.蛋白電泳—蛋白根據(jù)分子量的發(fā)現(xiàn)分開

SDS（負電）-PAGE：十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳

分子量大的跑得慢，在膠的頂部。

2、轉(zhuǎn)膜（膜與蛋白有高度親和的能力）

從膠內(nèi)部轉(zhuǎn)移到膜表面，更容易和蛋白結合。

常用的兩種：硝酸纖維素膜

PVDF（聚偏氟乙烯）膜

蛋白負電，膠和膜之間加一個電場。

濾紙：維持transfer buffer穩(wěn)定流動。

里面會加甲醇：幫助蛋白更好地與膜結合。使蛋白與SDS分離。

3.封閉—封閉膜的空白結合位點，防止膜與抗體直接結合。阻止非特異性結合。

脫脂牛奶或BSA

4.加抗體，檢測

1）一般先加一抗：與蛋白特異性結合。洗膜：未結合一抗洗掉。

2）二抗：被標記了的抗體：可結合多個一抗，放大信號。孵育后，洗去多余的。

HRP：辣根過氧化物酶。