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凋亡檢測(cè)實(shí)驗(yàn)——艾美捷喜樹堿(Camptothecin)基本操作

2022-12-28 14:33 作者:艾美捷  | 我要投稿

Background:

Camptothecin is a potent cytotoxic pentacyclic alkaloid known for its potent apoptosis inducing properties. Camptothecin and its analogs have been demonstrated to inhibit topoisomerase I (topo I), causing cells in S phase to enter into apoptosis. Camptothecin binds to and stabilizes the topo I?–?DNA backbone complex (covalent binary complex). This stabilized complex diminishes the rate of topo I release from the broken strand, thus slowing the religation and subsequent DNA synthesis process. Use camptothecin to create positive controls in apoptosis detection experiments.

Reagent Name?Camptothecin

Target?DNA topoisomerase I

Sample Type?Cell culture

Storage?-20°C

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基本信息:

中文名:喜樹堿

英文名:Camptothecin

化學(xué)名:1H-Pyrano[34:6,7]indolizino[1,2-6]puinoline-3,14(4H,12H-)-dione,4-ethy1-4-hydroxy-(s)-

分子式: C20H16N2O4

分子量:?348.34

來(lái) 源:?珙桐科植物喜樹Camptotheca acuminata Decne的果實(shí)、葉。

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喜樹堿是一種植物抗癌藥物,從中國(guó)中南、西南分布的喜樹中提取得到。1976年中國(guó)化學(xué)家高怡生等合成消旋喜樹堿成功。喜樹堿對(duì)腸胃道和頭頸部癌等有較好的近期療效,但對(duì)少數(shù)病人有尿血的副作用。10-羥基喜樹堿的抗癌活性超過喜樹堿,對(duì)肝癌和頭頸部癌也有明顯療效 ,而且副作用較少。

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艾美捷喜樹堿是一種具有抗腫瘤特性的細(xì)胞毒性植物生物堿,是一種原型DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑。在凋亡檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中使用喜樹堿創(chuàng)建陽(yáng)性對(duì)照。

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艾美捷喜樹堿(Camptothecin)基本操作:

1、將喜樹堿粉末溶解在組織培養(yǎng)級(jí)DMSO中,以獲得2mg/mL喜樹堿儲(chǔ)備濃度。

2、制備50–100μL的DMSO增溶喜樹堿等分試樣,并將其冷凍保存在<-20°C。一瓶冷凍的喜樹堿可在丟棄前再解凍2次。應(yīng)標(biāo)記已解凍1X的小瓶,以表明這一點(diǎn),以便它們?cè)趤G棄前只經(jīng)過一次解凍。

3、喜樹堿濃度范圍為2–4μg/mL的刺突細(xì)胞培養(yǎng)物,產(chǎn)生6–12μM的細(xì)胞培養(yǎng)物喜樹堿濃度。該喜樹堿濃度范圍適用于誘導(dǎo)Jurkat或HL 60細(xì)胞懸浮液,其濃度范圍通常為1 x 105–1 x 106細(xì)胞/mL。在此濃度范圍內(nèi),培養(yǎng)4小時(shí)(37°C)后成功誘導(dǎo)凋亡。

4、對(duì)特定細(xì)胞系進(jìn)行時(shí)間歷程研究,以確定合適的喜樹堿濃度和暴露時(shí)間,從而為實(shí)驗(yàn)實(shí)現(xiàn)良好的凋亡誘導(dǎo)水平。

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艾美捷喜樹堿(Camptothecin)相關(guān)研究:

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