泌尿系統(tǒng)結石動物模型【北京動物實驗外包】

【造模機制】泌尿系統(tǒng)結石由尿內(nèi)多種晶體物質(zhì)和非晶體物質(zhì)凝聚而成,結石的病因與尿內(nèi)晶體濃度增高及尿液理化因素的改變有關,可發(fā)生于腎盂、輸尿管、膀胱、尿道等處。常用藥物誘發(fā)泌尿結石模型,可用誘石劑乙二醇、乙二酰胺、對苯二甲酸等通過增加尿液中草酸濃度而誘發(fā)動物體內(nèi)形成草酸鈣結石。

【造模方法】

1.乙二醇和氯化銨法選用 Wistar 雄性健康大鼠,體重 180～220g,隨機分組,1%乙二醇飲水+2%氯化銨,每天灌胃 1ml/只,連續(xù) 28 天,實驗結束前用代謝籠收集并測24 小時尿量和 24 小時尿液中草酸排出量。斷頸處死大鼠,下腔靜脈穿刺取血,3500r/min 離心 10 分鐘后,取上層血清檢測?BUN.Cr.P.Ca*+含量(Olympus Au1000 自動分析儀)。切取雙腎,縱向剖開,取左側腎臟用 10%中性甲醛固定,作常規(guī) HE 石蠟切片和 Von-Kossa's 染色,偏光顯微鏡觀察腎組織草酸鈣結晶形態(tài)分布及腎組織的病理改變,日立 180-80 型原子吸收光譜儀進行腎組織 Ca*t、Mg**含量,尿液中總 Ca+含量,總 Met含量測定。

2.乙二酰胺飼喂法選用 SD 大鼠,體重 220~240g;新西蘭家兔,4 個月齡,體置2.0~2.3kg。大鼠飼喂 1.2％乙二酰胺~鼠標準飼料 3 天以上,100%的大鼠造成泌尿系結石；新西蘭家兔飼喂 1%乙二酰胺-兔標準飼料 20 天,100％復制成腎結石。1.2%乙二酰胺-鼠標準飼料配法:取鼠飼料(30%豆粉,30%面粉,20%玉米粉,6%組粉,青油,0.5%維生素,1%酵母粉,9%麩皮,1.5％骨粉,1%食鹽)998k.加入乙二酰胺12g」充分拌勻,壓成顆粒料,經(jīng) 60～80℃烤干后備用。

3.對苯二甲酸法選用幼年 SD 大鼠,體重 50～60g,雌雄兼用,單籠飼養(yǎng)。飲料中加5%的致石劑苯二甲酸(TPA)(德國 Merck 公司產(chǎn)品),用此飼料飼養(yǎng)動物共 14 天,大鼠自由飲水。膀胱結石檢查方法是在戊***鈉麻醉下取出膀胱,用 10%中性甲醛固定,石蠟包埋,連續(xù)切片,片厚 8μ,每隔 10 片取 1 片作 Vonr-Kossa's 鈣顯示法染色,該法可見鈣鹽影黑色。切片染色后在顯微鏡下觀察、照相。

【模型特點】

1.乙二醇模型乙二醇+氯化銨給藥 28 天可見尿鈣、腎鈣明顯增加,腎組織可見大量草酸鈣結晶沉積。腎盂內(nèi)有小結石形成,晶體布滿全腎,E要存在于近曲小管和遠曲小管，上皮細胞明顯腫脹、變性、壞死,管腔明顯擴張。

2.乙二酰胺模型 68 只大鼠自食乙二酰胺-鼠標準飼料 3 天.6 天、9 天、13 天均產(chǎn)生肉眼可見的腎輸尿管和膀胱米黃色結石,其結石率達 100％。一般腎和膀胱結石小如小米，大如綠豆,形似不規(guī)則球狀;輸尿管結石好發(fā)部位在入膀胱口處,但亦見中部和上部栓塞樣結石。0.5％乙二酰胺-兔標準飼料喂 30 天,均能造成腎內(nèi)結石,其中 73％的動物為腎沙石,27％為腎結石；1%乙二酰胺給藥 20 天以上,100％的動物產(chǎn)生腎結石;2％乙二酰胺給藥 15天,93%為腎結石,7%為沙石。

3.對苯二甲酸(TPA)模型 5％的 TPA 致石劑飼喂大鼠 14 天可成功地建立大鼠實驗性膀胱結石模型。該模型特點是所有大鼠膀胱均含有鈣結石小體。

【應用范圍】泌尿系統(tǒng)結石實驗動物模型不但可以深入了解泌尿系統(tǒng)結石的形成過程和機制,印證或否定某一涉及泌尿系統(tǒng)結石成因的代謝問題,而且可以篩選抗結石的中西藥物,確認其臨床藥理。因此,設計和建立與人類泌尿系統(tǒng)結石相類似的動物模型,對探討泌尿系統(tǒng)結石的發(fā)病機制,預防和延緩結石形成,尋找防治泌尿系統(tǒng)結石的藥物等方面均占有重要的位置。

【注意事項】

1.灌胃給藥與自由攝取相比,有用量準確且恒定的優(yōu)點可避免自由攝取時不易控制給藥量的不足,應用時應予注意。

2.毒性劑氯化銨與 1%乙二醇配用成石效果佳但氯化銨的濃度選擇很重要,0.75％氯化銨+1%乙二醇,需要給藥 8 周,1%和 2%氯化銨分別灌胃 1 周和 3 周均能明顯促進1%乙二醇的誘石效果,鑒于氯化銨對消化道有刺激作用,使大鼠厭食、消瘦、委靡,因此 1%氯化銨+1%乙二醇飲用 1 周成為最佳誘石組合。

【模型評估】泌尿系統(tǒng)結石中草酸鈣結石占 60％,常以乙二醇等為誘石劑,促使體內(nèi)草酸明顯增加,尿草酸濃度升高,形成泌尿系統(tǒng)結石,其造模結果穩(wěn)定,重復性好,形成的結石大多分布在腎乳頭、髓質(zhì)及皮質(zhì)等部位,且為慢性成石,適用于防結石藥物的篩選,療效觀察及成石過程中的病理學研究。

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