抑郁癥是一種情感性精神障礙，以顯著而持久的心境低落、快感缺失、絕望感和無價值感為主要特征，并伴有植物神經(jīng)功能紊亂的綜合征。世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明抑郁癥的全球發(fā)病率達10%～15%，抑郁癥的高自殺和自殘率嚴重危害患者的身心健康、工作學習生活及社會交往，同時產(chǎn)生極大的社會經(jīng)濟負擔。抑郁癥正成為繼心腦血管疾病之后導致人類死亡和致殘的第二大類疾病。

大鼠和小鼠抑郁行為檢測方法是基于興趣缺失、心境低落、絕望和無價值感為主要特征而設計的。抑郁行為實驗方法主要包括糖水偏愛、新奇環(huán)境攝食抑制、新奇物體探索、曠場、強迫游泳、懸尾、獲得性無助等。

一、獲得性無助實驗(learned helplessness test)

1、實驗方法：

本實驗主要分為模型的建立期和條件性回避反應測試期。

(1) 模型建立期：?

a：實驗當天動物應放入測試箱(A室或B室) 中，適應5min。

b：動物應在電擊箱內(nèi)接受30~ 60個運行周期的循環(huán)電擊。每個運行周期應包括無信號不可逃避的雙室足底電擊期和間歇期，電擊時間應為3～10s，間歇期時間應為3～10s。電刺激頻率宜為5～15Hz，刺激電流強度應為大鼠 0.65～1.80mA，推薦 0.8mA；小鼠0.15～0.6mA，推薦0.25mA。如采用電壓，大鼠應為65～70V，小鼠30～36V。

(2)條件性回避反應測試期：

a：模型建立結束后第2天應進行條件性回避反應測試。

b：動物放入測試箱(A側或B側) 中，適應5min后，進行15～30個運行周期的實驗。

c：每個運行周期的總時間應為30s，包括3～10s的條件刺激(燈光/聲音) 、3～10s的條件刺激+非條件刺激(電擊條件同前)和5～25s間歇期(不給以任何刺激)。

d：重復上述步驟連續(xù)2～3d。

2、評價指標

(1) 逃避失敗次數(shù)(times of evasion failures)：動物在設定的非條件刺激持續(xù)時間內(nèi)未完成回避反應的總次數(shù)；逃避失敗次數(shù)與動物的抑郁程度成正比。

抑郁行為判斷標準：30次電擊，動物逃避失敗次數(shù)大于25次或者與對照組相比具有顯著性增加(P＜0.05) 。

(2) 逃避潛伏期(escape latency)：實驗開始后，動物第1次穿梭至對側測試箱的時間；逃避潛伏期與動物的抑郁程度成正比。抑郁行為判斷標準：逃避潛伏期大于15s或者與對照組相比具有顯著性增加(P＜0.05) 。

(3) 其他：主動回避次數(shù)、安全區(qū)時間(無電區(qū)域) 、運動總時間(實驗期間動物處于運動狀態(tài)的時間)、運動總路程(實驗期間動物物理位移的總和)等實驗指標亦作為抑郁行為輔助評價指標。這些指標值越少，表明動物抑郁程度越重。

二、強迫游泳實驗(forced swim test)

1、實驗方法

(1) 實驗前調(diào)節(jié)測試箱內(nèi)水溫，水溫應為23～25℃。水深應根據(jù)動物體重進行調(diào)整，動物尾巴與測試箱底面保持一定距離。

(2) 如同時進行多只動物實驗，每兩只動物間應用不透明擋板隔開。

(3) 大鼠強迫游泳實驗，應在實驗前1d預游，24h后進行強迫游泳實驗。記錄5min內(nèi)動物的不動時間、游泳時間及攀爬時間。

(4) 小鼠強迫游泳實驗，應在檢測當天進行，小鼠游泳時間應為6min，記錄后4min的游泳時間、不動時間及攀爬時間。

2、評價指標

評價指標應采用動物不動、攀爬、游泳三類動作的時間及次數(shù)進行判定。

(1) 不動(immobility)：動物在水中停止掙扎，呈漂浮狀態(tài)，僅有輕微的肢體運動以保持頭部浮在水面。不動時間越長表明抑郁程度越重。正常小鼠不動時間在檢測時間的40%～80%內(nèi)；正常大鼠不動時間在檢測時間的30%～70%內(nèi)；抑郁行為判斷標準：不動時間與對照組相比顯著性增加(P＜0.05) 。

(2) 游泳(swimming)：動物進行流暢、協(xié)調(diào)的運動，動物四肢始終在水面以下。游泳時間和游泳距離越少，表明抑郁程度越重。

(3) 攀爬(climbing)：動物四肢強有力伸出水面，并沿測試箱壁做劇烈的上下動作。5min檢測期內(nèi)，SD大鼠攀爬時間60～130s。攀爬時間越少，表明動物抑郁程度越重。

MDL近期開展的強迫游泳的視頻

，時長00:39

三、懸尾實驗(tail suspension test)

1、實驗方法

懸尾實驗多采用小鼠，其操作方法如下：

(1) 實驗開始前，動物尾部懸吊使小鼠呈倒懸體位，頭部應與懸尾箱底面保持一定距離。

(2) 如同時進行多只動物實驗時，每兩只動物間應用不透明擋板隔開。

(3) 記錄檢測期動物的不動時間。

(4) 實驗時間應為6min，記錄后4min內(nèi)動物的不動時間。

2、評價指標

用不動、運動掙扎二類動作行為的時間進行判定。

(1) 不動：動物停止掙扎，身體保持垂直倒懸狀態(tài)，靜止不動。動物的在懸尾實驗中的不動時間越長表明抑郁程度越重?？瞻讓φ战Mc57小鼠不動時間較長，均值多大于100s；空白對照組ICR小鼠不動時間均值多小于 100s；抑郁行為判斷標準：不動時間與對照組相比有顯著性增加(P＜0.05) 。

(2) 運動掙扎：動物有明顯可見的掙扎運動。運動掙扎時間越短，表明抑郁程度越重。

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，時長00:48

四、糖水偏愛實驗(sucrose preference test)

1、實驗方法

大、小鼠糖水偏愛實驗的操作方法上略有不同，對其分別進行總結如下：

(1) 大鼠糖水偏愛實驗：訓練期：動物應單籠飼養(yǎng)，進行48h的蔗糖飲水訓練。前24h給予兩瓶1%～2%蔗糖水，后24h，一瓶給予1%～2%蔗糖水，另一瓶給予飲用純水(中途交換兩個水瓶位置) 。大鼠禁食禁水14～ 23h 后，進行糖水偏愛指數(shù)的測定：測定1h內(nèi)大鼠對兩瓶水的飲用量(g) 。

(2) 小鼠糖水偏愛實驗：操作流程同大鼠。但在48h飲水訓練時，應全程給予1%～2%蔗糖

水和飲用水(中途交換兩個水瓶位置)。訓練期結束后，禁水(不禁食)9～16h，測定8～15h內(nèi)(中間宜交換兩瓶位置1次)小鼠對兩瓶水的飲用量(g) 。

2、評價指標

應采用蔗糖偏嗜度(sucrose preference) 作為評價指標，蔗糖偏嗜度(%)=蔗糖水飲用量/(蔗糖水飲用量+飲用水飲用量)×100%。

抑郁行為判斷標準：蔗糖偏嗜度低于0.4或者與對照組相比有顯著性減低(P＜0.05)。

五、曠場實驗(open field test)

1、實驗方法

曠場實驗操作簡單，在用于抑郁行為學評價中，無適期階段，操作步驟如下：

(1) 實驗前，動物應適應檢測環(huán)境30～60min；

(2) 動物放入測試箱后，即開始檢測，檢測時間宜為5～10min；

(3) 每次實驗時應從同一位置同一方向將動物放入測試箱中央。

2、評價指標

(1)總路程(total distance)：動物在實驗記錄時間內(nèi)產(chǎn)生的物理位移累積；(2)速度(speed)：動物在單位時間產(chǎn)生的物理位移。5min內(nèi)正常動物總路程多為1000～2500cm，速度為3～8cm/s。動物出現(xiàn)抑郁行為時，速度減少；(3)運動總時間(totalmove time)：動物在實驗記錄時間內(nèi)的產(chǎn)生物理位移時所需的時間累積。正常動物運動時間多大于檢測時間的30%; 抑郁行為判斷標準：與對照組相比有顯著性減低(P＜0.05)；(4) 站立次數(shù)(number of standing)：動物在實驗記錄時間內(nèi)的站立總次數(shù)。10min檢測時間，正常大鼠站立次數(shù)20～50次。

10min檢測時間，空白對照組小鼠站立次數(shù)60～130次; 抑郁行為判斷標準：與對照組相比顯著減低(P＜0.05) 。

六、新奇事物探索實驗(novel objective test)

新奇事物探索實驗是一種較新的評價抑郁癥的典型癥狀：興趣缺失的行為學方法。其主要是研究動物對新奇事物的探索行為，是基于動物先天的尋求新奇的行為，并用此來評價抑郁癥模型是否存在興趣缺失癥狀的方法，一般情況下抑郁癥模型動物在新奇事物實驗中的探索行為減少。

1、實驗方法

新奇事物探索實驗分為適應期和測試期兩個階段，操作步驟如下：

(1) 適應期：動物放入自發(fā)活動測試箱，適應5min后，取出，放回原籠；

(2) 測試期：在同一環(huán)境條件下引入一新物體(應放入中心位置)，再將待測動物面壁放入測試箱，開始實驗;

(3) 檢測時間應為10min。

2、評價指標

潛伏期(latency period)：實驗開始至動物首次主動探索(接觸)物體的時間。如規(guī)定檢測時間內(nèi)，動物沒有接觸新物體，則潛伏期記錄為檢測時間。正常大鼠潛伏期多在130s以內(nèi)。抑郁行為判斷標準：與對照組相比有顯著性增加(P＜0.05)。(注：動物對新物體的探索標準：動物口鼻在新奇物體≤2cm范圍內(nèi)，直指向新奇物體或直接接觸物體)。