慢病毒載體（Lentivirus）是一類改造自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒載體，是逆轉錄病毒的一種，基因組是RNA，其毒性基因已經被剔除并被外源性目的基因所取代，屬于假型病毒可將外源基因整合到基因組中實現穩(wěn)定表達，具有感染分裂期與非分裂期細胞的特性。

慢病毒基因組進入細胞后，在細胞漿中反轉錄為DNA，形成DNA整合前復合體，進入細胞核后，DNA整合到細胞基因組中。整合后的DNA轉錄成mRNA，回到細胞漿中，表達目的蛋白或產生小RNA。慢病毒介導的基因表達或小RNA干擾作用持續(xù)且穩(wěn)定，并隨細胞基因組的分裂而分裂（圖1）。

慢病毒載體具有宿主范圍廣，免疫原性低，基因容量大，可以長期表達等特點。能夠有效地感染培養(yǎng)的腫瘤細胞、肝細胞、心肌細胞、神經元、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞。

　　慢病毒的感染具有整合特性，能夠將外源基因有效地整合到宿主染色體上，達到持久性表達，因而可構建穩(wěn)定細胞株，用于基因的細胞功能研究。借助慢病毒載體改造T細胞可用于CAR-T細胞治療。

慢病毒包裝與純化

　　慢病毒包裝采用三質?；蛩馁|粒系統進行包裝，收集細胞培養(yǎng)上清，通過超速離心濃縮純化和收集病毒。

慢病毒滴度檢測

　　檢測方法：定量PCR檢測感染后細胞基因組中外源DNA拷貝數

　　實驗原理：慢病毒介導外源基因以逆轉錄方式整合進目的細胞基因組

慢病毒載體優(yōu)勢

① 表達時間長：慢病毒可將外源基因整合到宿主細胞基因組上，實現基因長時間穩(wěn)定的表達，不隨細胞分裂傳代而丟失，是細胞實驗的首選，常用于構建穩(wěn)定株。
② 安全性高：未發(fā)現致病性，慢病毒載體改造T細胞用于CAR-T細胞治療。
③ 免疫原性低：直接注射活體組織不易造成免疫反應，適用于動物實驗。

常規(guī)應用

體外感染細胞

　　慢病毒載體能夠有效地感染培養(yǎng)的腫瘤細胞、肝細胞、心肌細胞、神經元、內皮細胞、干細胞等多種類型原代細胞和大部分細胞系。

　　慢病毒的感染具有整合特性，能夠將外源基因有效地整合到宿主染色體上，因而可以達到持久性表達，從而構建穩(wěn)轉細胞株，體外進行細胞功能學實驗，包括細胞增殖、侵襲、遷移、凋亡等研究。穩(wěn)定表達目的基因的腫瘤細胞株還可以進一步構建腫瘤動物模型，進行體內基因功能驗證，藥效藥代，活體成像等檢測，進一步研究體內腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉移及藥物治療的效果。

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