2.9.1 疫苗制備：使用PBS將重組蛋白濃度調(diào)整為50ug/ml，取1ml與等體積ISA-201佐劑混勻后短暫超聲乳化制備疫苗。

2.9.2 小鼠免疫：60只BALB/c小鼠隨機(jī)分成6組（10只/組），即。。。，每只小鼠免疫25ug蛋白，共進(jìn)行2次后肢肌肉注射免疫，免疫間隔2周。PBS免疫對(duì)照注射200ul PBS。

2.9.3 血清提取：三次采血，在初次免疫以前及每次免疫后2周，即首免0天、14天及28天，用眼眶取血法進(jìn)行小鼠血液的采集。將收集的血液樣品加至1.5ml EP管中，37℃靜置1h后，3000rpm離心30min。隨后吸取上清至新的1.5ml EP管中。3000rpm離心30min后，收集血清。將血清置于56℃水浴鍋中30min。最后，將滅活的血清分裝并于-20℃條件下凍存?zhèn)溆谩?/p>

2.9.4 小鼠剖殺取脾臟：在首次免疫后第14天及28天，每組隨機(jī)選取5只小鼠，解剖后采集脾臟，準(zhǔn)備進(jìn)行小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的分離（后面詳細(xì)步驟）。