酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)?(ELISpot)?是一種可用于對(duì)96孔板內(nèi)的一百萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)對(duì)單個(gè)分泌細(xì)胞進(jìn)行定量檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)方法。高靈敏度的ELISpot是一種檢測(cè)數(shù)量稀少的細(xì)胞因子分泌細(xì)胞?(30萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中才存在1個(gè))?的強(qiáng)效技術(shù)，并被廣泛應(yīng)用于癌癥研究，疾病探索以及疫苗研發(fā)等領(lǐng)域。

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ELISpot與傳統(tǒng)ELISA區(qū)別（艾美捷整理如下）：

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ELISpot實(shí)驗(yàn)步驟與原理示意 （示意圖如下）

大致原理上分為如下7個(gè)步驟，詳情已具體產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)

Step.1?包被：將單克隆捕獲抗體添加到乙醇處理的PVDF膜板上

Step.2?細(xì)胞孵育：在有刺激的情況下加入細(xì)胞，孵育，細(xì)胞分泌細(xì)胞因子

Step.3?捕獲分泌物：激活后的細(xì)胞，分泌的細(xì)胞因子被周圍的抗體結(jié)合捕獲

Step.4?檢測(cè)抗體：去除細(xì)胞，清洗平板，加入生物素化的檢測(cè)抗體

Step.5?鏈霉親和素-酶偶聯(lián)物：加入鏈霉親和素偶聯(lián)物，保證后續(xù)在膜上形成斑點(diǎn)

Step.6?加反應(yīng)底物：當(dāng)酶催化時(shí)，顯色底物形成不溶性沉淀

Step.7?結(jié)果分析：在自動(dòng)點(diǎn)閱讀器中對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。每個(gè)斑點(diǎn)對(duì)應(yīng)一個(gè)分析物分泌細(xì)胞

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如何挑選合適的ELISpot試劑盒？

針對(duì)不同的研究需要，使用不同格式的ELISpot試劑盒，從ELISpotBASIC到完整的ELISpotPRO試劑盒。

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艾美捷建議，根據(jù)用戶偏好，比如想要設(shè)置和優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，開(kāi)發(fā)kit的用戶，可使用ELISpot基礎(chǔ)自開(kāi)發(fā)款，大部分客戶的選擇：ELISpotPLUS預(yù)包被，想要zui短的時(shí)間，就選ELISpotPRO一步法。