艾美捷Worthington?核糖核酸背景：

核糖核酸是通過?3',5'-磷酸二酯鍵連接的核苷酸的長鏈聚合物。組成堿基是嘌呤和嘧啶的衍生物，糖是?D-核糖。RNA?核苷酸序列是從?DNA?傳遞的遺傳信息，在蛋白質(zhì)合成中作為氨基酸測序的模板。參見?JD Watson?的基因分子生物學(xué)第?3?版（WA Benjamin, Inc., Menlo Park, California 1975）中的第?11?章?- DNA?模板上的?RNA?轉(zhuǎn)錄和第?12?章?- RNA?參與蛋白質(zhì)合成。核糖核酸核心由酵母核酸鈉徹底核糖核酸酶水解后剩余的有限多核苷酸組成。

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艾美捷Worthington?核糖核酸化學(xué)結(jié)構(gòu)：

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艾美捷Worthington?核糖核酸測定：

Method :?通過在?RNase?測定中用作底物來確定作為?RNase?底物的適用性。由于反應(yīng)發(fā)生的速率不同以及從生物來源分離的?RNA?中核苷酸模式的顯著差異，核糖核酸酶活性的標(biāo)準(zhǔn)化一直很困難?？唆斂说热?。(1960)?發(fā)表了使用合成底物?2', 3'-磷酸胞苷的測定。Zimmerman?和?Sandeen (1965)?描述了一種使用聚胞苷酸的靈敏測定。

Kalnitsky?等人的方法。（1959）在沃辛頓使用。酵母?RNA?在?pH 5.0?的水解速率是通過測量在規(guī)定條件下釋放的酸溶性寡核苷酸的量來確定的。在指定條件下，一個(gè)單位會(huì)導(dǎo)致?A260?在?37°C?和?pH 5.0?下的吸光度增加?1.0。

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試劑：

0.10 M?醋酸鈉緩沖液，pH 5.0：將?5.75 ml?冰醋酸溶解在?900 ml?試劑級(jí)水中。用?5 N NaOH?將?pH?值調(diào)節(jié)至?5.0，并用試劑級(jí)水使最終體積達(dá)到?1000 ml。

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含有?0.75%?乙酸雙氧鈾的?25%?高氯酸：將?50 ml 70%?高氯酸?(HClO 4 )?溶解在?90 ml?試劑級(jí)水中。添加?750 mg?乙酸雙氧鈾?(MW 424.15)?并攪拌溶解。

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RNA?溶液：將?100 mg Worthington?核糖核酸?(RNA)?溶解在?10 ml 0.1 M?醋酸鈉緩沖液中，pH 5.0?輕輕攪拌以溶解以防止變性。在?0.10M?醋酸鈉?pH 5.0?中以?1:50?稀釋度記錄?A260，以確定?mg RNA/ml。mg RNA/ml = A260 x?稀釋度?x 0.04

在?0.10M?醋酸鈉中稀釋至?2.5 mg/ml RNA，pH 5.0?用于測定。測定前在?37°C?下孵育?5-10?分鐘。準(zhǔn)備一份待測?RNA?溶液，以及另一份不同批次?RNA?的溶液用作對(duì)照。

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RNAse：

在試劑級(jí)水中制備?1 mg/ml?的儲(chǔ)備溶液。

在即將進(jìn)行測定之前，在?0.10 M?醋酸鈉，pH 5.0?中進(jìn)一步稀釋至每毫升?2、4?和?6?微克。

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程序：

確定?% Native RNA：將?10 mg RNA?溶解在?10 ml 0.015% NaCl?中。在?NaCl?中按?1:50?稀釋，將?3 ml?移液器移入比色杯中，在?260 nm?和?320 nm?處讀數(shù)。加入?0.2 ml 5N NaOH（新鮮，儲(chǔ)存在塑料中）。在?260?和?320 nm?處讀取。在?37°C?下靜置一小時(shí)。在?260?和?320 nm?處讀取。確定?% Native：（如果低于?60%，請(qǐng)聯(lián)系主管。）。

A320?是對(duì)無關(guān)背景的檢查。

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RNase Blank Assay：（可通過?RNase?檢測設(shè)置）為樣品?RNA?設(shè)置空白，為測試?RNA?設(shè)置空白。將?1 ml 0.10M?醋酸鈉緩沖液?pH 5.0?移入離心管中。平衡至?37°C。加入一毫升?RNA?溶液（2.5?毫克/毫升）。讓我們?cè)?37°C?設(shè)置一小時(shí)。然后加入一毫升乙酸雙氧鈾-高氯酸溶液。轉(zhuǎn)移到冰浴中冷卻?5?分鐘。離心澄清并用試劑級(jí)水將?0.1ml?澄清上清液稀釋至?3.0ml。閱讀?A260?與空白。在?37°C?下，空白在一小時(shí)內(nèi)不應(yīng)增加超過?50%。

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RNase Assay： 為樣品設(shè)置一組試管，為對(duì)照設(shè)置一組試管。包括帶有樣品管組的空白和帶有對(duì)照管組的空白。移取一毫升相應(yīng)的酶稀釋液到離心管中；吸取?1 ml 0.10M?醋酸鈉緩沖液?pH 5.0?到空白管中。將所有試管在?37°C?下孵育?58?分鐘。每隔一段時(shí)間，將?1 ml RNA?溶液?(2.5 mg/ml)?添加到所有試管（樣品、對(duì)照和空白）中。將每管準(zhǔn)確孵育?4?分鐘，加入?1 ml?乙酸雙氧鈾-高氯酸溶液終止反應(yīng)。轉(zhuǎn)移到冰浴中冷卻?5?分鐘。離心澄清并用試劑級(jí)水將?0.1 ml?澄清的上清液稀釋至?3.0 ml。閱讀?A260?與空白。

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計(jì)算

單位/mg dw = (A260 -?空白) x 30 x?稀釋?x?標(biāo)準(zhǔn)化因子

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注意：由于用作底物的?RNA?來源于天然來源，因此會(huì)出現(xiàn)批次間差異。為了克服這一點(diǎn)，運(yùn)行核糖核酸酶標(biāo)準(zhǔn)并將值調(diào)整為標(biāo)準(zhǔn)。示例：如果分配給標(biāo)準(zhǔn)的值為?2500 u/mg，而獲得的標(biāo)準(zhǔn)值為?2000 u/mg，則將?1.25?的系數(shù)應(yīng)用于化驗(yàn)值。

Worthington核心酶：包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

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Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。