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牛血清白蛋白(BSA)在生化實驗中的作用

2022-03-18 16:13 作者:艾美捷  | 我要投稿

牛血清白蛋白(BSA)在生化實驗中有廣泛的應用,?例如在WB實驗中加入BSA,?通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度,對酶起保護作用。防止酶的分解和非特異性吸附,能減輕有些酶的變性,減輕不利環(huán)境因素如加熱,表面張力及化學因素引起的變性的。

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牛血清白蛋白測定蛋白濃度:

按50:1配置BCA工作液。10ulC液(蛋白標準)+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標準液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標準液加入96孔板的第1~8標準孔中,在其他樣品孔中加入10ul待測樣品。分別加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液,室溫放置2小時。用酶標儀測定蛋白濃度:測定A562,依標準曲線算出蛋白濃度。

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牛血清白蛋白SDS-PAGE電泳

1?制 膠:?按比例配制分離膠,緩緩地搖動溶液,使激活劑混合均勻,將凝膠溶液平緩地注入兩層玻璃J中,再在液面上小心注入一層水,以阻止氧氣進入凝膠溶液中,靜置40min。同前按比例配制濃縮膠,但混勻溶液時不要過于劇烈以免引入過多地氧氣。吸去不連續(xù)系統(tǒng)中下層分離膠上的水分,連續(xù)平穩(wěn)的注入凝膠溶液,然后小心插入梳子并注意不得在齒尖留有氣泡,靜制60min以上以保證完全聚合。

2?預電泳: 將聚合好的凝膠安置于電泳槽中,小心拔去梳子,加入電泳緩沖液后低電壓10-20V的預電泳20-30min。(目的是清除凝膠內(nèi)的雜質(zhì), 疏通凝膠孔徑以保證電泳過程中電泳的暢通)。

3?樣品準備:首先計算上樣體積,然后按樣品:上樣buffer=4:1的比例加入上樣bufer混勻,沸水10分鐘,冰上5分鐘。

4?加 樣: 預電泳后依次加入標準品(Marker)和待分析樣品。(加樣時間要盡量短,以免樣品擴散,可在未加樣的孔中加入等量的樣品緩沖液避免邊緣效應。每個泳道加5ul?。

5?電 泳: 加樣完畢,選擇80V恒壓進行電泳,電泳直至溴酚藍染料前沿到達兩膠交界處(一般約20分鐘),更換至100V恒壓電泳,電泳直至溴酚藍染料前沿下至凝膠末端處,即停止電泳(一般約為1小時20分鐘)。

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艾美捷牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應用,例如在western blot中作為封閉試劑.血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養(yǎng)作用.在動物細胞無血清培養(yǎng)中,添加白蛋白可起到生理和機械保護作用和載體作用。

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艾美捷牛血清白蛋白粉末,熱處理,診斷級是以USDA認證的牛源血漿作為原料,使用磚利的熱處理方法滅活蛋白酶并經(jīng)過進一步的非溶液步驟去除脂肪和其它血漿蛋白.診斷級牛血清白蛋白粉末是專門用于減少可能會產(chǎn)生背景干擾以及細胞培養(yǎng)體系抑制等因素,該牛血清白蛋白不含蛋白酶,不含或具有很低活性的內(nèi)毒素、生物負載以及IgG等。

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另外,該診斷級牛血清白蛋白可用于蛋白標準品、稀釋劑、偶聯(lián)物或者酶穩(wěn)定劑,也可以應用于高靈敏度的免疫分析實驗、細胞培養(yǎng)以及雜交實驗等.另有5kg以及10kg等更大規(guī)格包裝,是目前較高質(zhì)量的牛血清白蛋白(BSA)科研用品。


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